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Symmetry色譜柱的使用注意事項(含保護柱、樣品制備、pH、壓力等)

更新時間:2024-09-23      點擊次數(shù):234

為確保Symmetry色譜柱始終保持理想性能,請遵循以下原則:

 

a. 保護柱

在進樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)和顆粒大小都適合的沃特世保護柱。使用匹配的高性能保護柱,是保護主色譜柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時,通常表明需要更換保護柱。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護柱。

 

b. 樣品制備

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度,優(yōu)先選用運行分析時要用的流動相或比它更弱的流動相(有機改性劑含量更低)來制備樣品。

3. 如果樣品不是使用流動相制備的,務(wù)必確保樣品、溶劑和流動相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖液產(chǎn)生沉淀。用0.2μm濾膜過濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機改性劑(如乙腈、甲醇等),請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性?;蛘?,可以考慮在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液

轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

 

c. pH值范圍

Symmetry色譜柱的推薦pH范圍為2~8。表2列出了常用的緩沖液和添加劑。此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖液類型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。

2:在pH 2~8范圍內(nèi)使用Symmetry色譜柱時的推薦緩沖液。

image.png

 

d. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能,請使用優(yōu)質(zhì)的色譜級溶劑。所有水性緩沖液在使用前都必須過濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會堵塞色譜柱入口篩板的外表面,這會導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。使用前,請將所有溶劑徹底脫氣,避免泵和檢測器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線脫氣裝置。運行低壓梯度時,溶劑脫氣尤其重要,因為在梯度運行過程中混合水相溶劑與有機溶劑時可能形成氣泡。

 

e. 壓力

  Symmetry色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi400 bar40 Mpa),但為了盡可能延長色譜柱和系統(tǒng)使用壽命,應(yīng)避免壓力超過4,000-5,000 psi。

 

f. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,Symmetry色譜柱的推薦操作溫度范圍為20~45℃。但是,任何高于室溫的溫度都會對色譜柱壽命產(chǎn)生不良影響,色譜柱壽命還會根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

 

IV. 放大/縮小等度方法

  以下公式可在保持線性流速不變的前提下放大或縮小方法,并計算出新方法的上樣量:

如果色譜柱內(nèi)徑和長度改變:

F2 = F1(r2/r1)2

進樣體積1 = 進樣體積2 (r2/r1)2(L2/L1)

其中: r = 色譜柱半徑(mm)

F = 流速(mL/min)

L = 色譜柱長度(mm)

1 = 原始或參比色譜柱

2 = 新色譜柱

 

V. 故障排除

  保留時間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請參閱“色譜柱清洗、再生和儲存"有關(guān)色譜柱故障排除問題的信息,請參閱最新的waters目錄。


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